ABSTRACT
Toxoplasma gondii es un protozoo parásito intracelular obligado que infecta a los vertebrados de sangre caliente. Alrededor de un tercio de la población humana está crónicamente infectado con este parásito, y la infección es causada principalmente por la ingestión de carnes mal cocida que contiene quistes viables de T. gondii u ooquistes de las heces de gatos infectados. Aunque la infección humana con T. gondii suele ser asintomática, la toxoplasmosis ocular y linfadenopatia cervical u occipital se produce en algunos pacientes. La infección congénita o los casos de reactivación en immunodeprimidos pueden conducir a la encefalitis mortal. En este trabajo se analizaron dos marcadores moleculares, denominados B1 y TgIRE para la detección de taquizoítos circulantes de T. gondii, en muestras biológicas mediante la técnica de PCR en tiempo real para el diagnostico precoz de la Toxoplasmosis, utilizando dos sistemas de detección, TaqMan y SYBR Green I. El análisis del estudio comparativo se baso en la diferencia en el número de ciclos necesarios para alcanzar el umbral de detección (Ct) en las distintas cantidades de taquizoítos, donde se evidencio una sensibilidad superior del sistema TaqMan frente al SYBR Green I en ambos marcadores biológicos. El marcador B1 permitió la detección de 10 Tq mediante ambos sistemas; aunque reveló un valor de Ct superior para TaqMan (34.15+-0,99) frente a SYBR Green I (37,51+-1,538) y en un caso TaqMan detecto el ADN correspondiente a solo 1Tq. La diferencia entre los sistemas fue mas evidente en el elemento TgIRE donde el limite de detección para SYBR Green I fue de 1000Tq con valores de la media de Ct de 39,24+-0,39, cercanos al final del ciclo de amplificación, en cambio para el sistema TaqMan fue 100 veces superior, al permitir la detección de 10 tq con valores de Ct promedio de 38,27+-0,71,. Estos valores permitieron observar que B1 denota un límite de detección superior a TgIRE dentro del sistema más sensible. Dado estos resultados se evaluaron distintos fluidos biológicos por el sistema de detección B1-TaqMan, que suministraron los siguientes resultados: en muestras de humor acuosos la detección de la carga parasitaria fue de entre 1000 a 10 tq; en muestras de LCR los valores se situaron cercano al limite de detección de entre 1 y 10 taquizoítos; en mustras de sangre el valor de detección fue inferior a 10 tq; en muestras de tejido la detección fue próximo entre 1000 a 1 taquizoítos y en muestras de liquido amniótico no se ha evidenciado presencia de ADN de T.gondii. Estos resultados permiten proponer al sistema B1-TaqMan como una herramienta valiosa en el diagnostico temprano de la toxoplasmosis humana, en especial en pacientes inmunosuprimidos donde su sistema inmunológico esta deteriorado y los test serológicos utilizados para la detección de anticuerpo anti-T. gondii son de poca utilidad.